核酸浓度与纯度的检测的意义 用260/280检测核酸纯度到底准不准确

用260/280检测核酸纯度到底准不准确  

用260/280检测核酸纯度到底准不准确

首先
Warburg和Christian（1942）提出OD260/OD280比值是蛋白制品被核酸所污染程度的很好指标。当蛋白中掺入了核酸之后，OD260/OD280比值变化很明显，尤其是纯的蛋白制品中掺入了一点点核酸后，变化最明显。例如：纯的蛋白样品，其OD260/OD280比值为0.57，而掺入5%的核酸之后，该笔直上升到了1.06。
但是反过来却是不成立的，即：这个比值不能用来指示核酸被蛋白污染的程度。因为核酸在260nm和280nm处的消光系数比蛋白质高很多，即使有明显的蛋白污染也不会大幅度改变核酸溶液的OD260：OD280比值。例如，纯的核酸的OD260：OD280比值是2.0，当掺入了5%的蛋白质污染之后，OD260：OD280比值变成1.99，掺入20%的蛋白质污染后，也才变成1.96。这就说明这个比值用来指示核酸被蛋白污染的程度是非常不灵敏的。
从下面这个表中就可以明显看出来。
蛋白质／ 核酸／ OD260:OD280
100 0 0.57
95 5 1.06
90 10 1.32
85 15 1.48
80 20 1.59
75 25 1.67
70 30 1.73
65 35 1.78
60 40 1.81
55 45 1.84
50 50 1.87
45 55 1.89
40 60 1.91
35 65 1.93
30 70 1.94
25 75 1.95
20 80 1.96
15 85 1.97
10 90 1.98
5 95 1.99
0 100 2
说得再明白一些，这个比值更适合衡量蛋白质中核酸的污染度的。
其次
蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处，但一定要注意：以上三者的吸收最高峰并不都在280nm处，其分别为257nm，275nm和280nm。当蛋白中的色氨酸含量偏高或偏低时，就一定会对260nm处的核酸吸收峰造成很大的影响。
第三
通常，使用 A260/A280 判断核酸的纯度。A260/A280 是一个给大家带来许多困惑的指标。以RNA为例，首先要明确该指标用于核酸的原始含义是：纯的 RNA，其 A260/A280 = 2.0 左右。纯 RNA 是‘因’，A260/A280 = 2 是‘果’。现在大家却在拿 A260/A280 当‘因’用，认为“如果 A260/A280 = 2，所以 RNA 是纯的”，自然会产生困惑。有兴趣的话，可以在你的 RNA 样品中加入一点抽提中经常使用的试剂，如苯酚，异硫氰酸胍，PEG 等，再测 A260/A280 比值。现实是，许多抽提 RNA 时使用的试剂，以及样品中的许多杂质都在 A260 和 A280 处附近有吸收，对 A260/A280 产生影响。
目前最具有指导性的做法是：对 RNA 样品在 200-300 nm 范围扫描。纯 RNA 的曲线具有如下特点：曲线平滑，A230 和 A260 是两个拐点，A300 接近 0，A260/A280 = 2 左右，A260/A230 = 2 左右，A260/A215 = 1 左右。如果没有扫描数据，除了测定 A260/A280 比值外，也一定要测定 A260/A230 比值，因为该比值对所有影响酶反应的杂质的残留更敏感。另外，要考虑设备的线形范围 (如 A260 要处于 0.1 - 0.5 之间)，超出线形范围的读数没有太大参考价值的。另外有两个有趣的现象：在水中测定 A260/A280，比值将变低 0.3 左右；而在 10mM EDTA 中测定的比值比在 1mM EDTA 中测定的高 0.2 左右。这两点也是要注意的，所以当我们用DEPC处理过的水溶解RNA并测定其260/280比值的时候，往往都是小于2.0的。

DiskGenius检测硬盘坏道准不准确

很负责任地告诉你，在常规系统下一点也不准，我检测了几次，每次结果都不一样，显示的坏道不在一个地方。在PE下检测却没有坏道

甲醛自测盒数据到底准不准确

误差较大，不建议使用。
甲醛检测的方法靠谱的有两种：
1.CMA 检测，其数据精准可靠，报告具有法律效力，可以作为衡量家中空气标准的依据。但价格较高，一般在300元/点以上。
2.除甲醛空气检测。除甲醛公司检测相比较CMA 机构要便宜一些，但数据同样可信。
这里要注意的是，甲醛自测盒和甲醛盒子等数据误差较大，不建议选择使用。

刷机精灵检测手机真假准不准确

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微车查询违章到底准不准确？

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亲子鉴定到底准不准确，

亲子鉴定准确率应该是100%的。但是通常情况下，简单的讲是否定的100%排除，肯定的亲权概率大于99.99%这种描述大家会比较容易理解。专业术语标准为遵循孟德尔遗传规律，联合应用亲子关系进行检测，其累积非排除率大于0.9999，说的就是这项的技术的固有的精确率，客观存在的。这是为什么呢？
亲子鉴定的是STR分型检测技术的的应用，STR分型就是短串联重复序列，就是小部分DNA片段，对于个体，其DNA信息是终身不会改变，也就是用于判定亲子关系的人类遗传基因座位点也是终身不会改变的，亲子鉴定第一步就是需要检测出个体的DNA信息，数据一旦检测出来就标定了这个人。
在确定个体的DNA信息后，分析两个人的亲子关系时，会排除同卵多胞胎、近亲及外源干扰的情况下，作出最后的判定，这三种被认为是影响结果误判的特殊情况。因此在结论描述的时候，一般亲子鉴定中心都会把这句话写在结论的前面，不管有还是没有这些特殊情况，足见其科学技术的严谨性。因此，当被鉴定人在自身排除这些特殊情况时，根据鉴定结论就是可以100%确定亲子关系的。

cpuz检测到底准不准

准确的，用CPU-Z测CPU性能，可以查看cpu的硬件信息，根据cpu信息来查看是否匹配该型号cpu，即可确定cpu是否为正版，
cpu-z查看cpu信息方法如下：
1、百度CPU-Z即可找到CPU-Z的下载地址,目前最新版是1.7.2.1，百度软件中心有下载。
2、下载后双击程序安装、进入开始菜单－所有程序－找到CPU-Z，点击即可运行。
3、CPU－Z除了可以显示CPU信息外，还可以显示显卡信息，主板信息，以及内存信息等。分了几个选项卡，点击不同选项卡即可查阅不同硬件信息。

检测核酸纯度方法

紫外吸收检测DNA浓度与纯度2007年11月13日 星期二 11:40目的： 了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法。
原理： 核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链
寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值
（OD260/OD280），估计核酸的纯度。纯净DNA的比值为1.8, RNA为2.0。若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除
尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。270nm存在高吸收表明有酚的干扰。 紫外分光光度法只能用于测定浓度
大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。
试剂与仪器： 提取的质粒DNA，紫外分光光度仪。
操作步骤：
1) 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。
2) 取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中。
3) 在260nm和280nm分别读出样品光密度值。如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍，即如
OD<SUB>260</SUB>=0.1，则样品浓度即为1μg/μl。
4) 若OD<SUB>260</SUB>/OD<SUB>280</SUB>大于1.8，说明仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品，若小于1.8，说
明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化DNA。

最近重新研读了分子克隆第三版，有一个有趣的小发现，好像过去没听人说过。一般测核酸浓度都是用260nm的光吸收值来决定，同时用260/280的比值来判断有无蛋白质污染。理想的比值是1.8~2.0左右。分子克隆第三版专门提到这种判断核酸纯度的办法是不可靠的。原因在于蛋白质在260nm的消光系数比核酸小很多，即使有相当多的蛋白质污染，这个比值还是接近于理想的比值。另外，260/280比值尤其不能用于评判寡聚核甘酸的纯度，因为嘌呤的消光系数比嘧啶大好多，寡聚核甘酸嘌呤嘧啶组成很可能不平均，所以很可能出现很纯的样品260/280比值却比较小的情况。 
你所说的‘消光系数‘，是否就是吸光值的意思？如果你用连续波长测过核酸的吸光度时，就会发现，OD260,恰好是核酸吸光值最大的时候，从200-750,是一条曲线，260时是波峰，而280时，刚好是曲线下降到一半左右时的吸光值。而恰好280又是蛋白质的最佳吸收值。如果纯的核酸，那曲线就是标准的，260/280就是1.8-2.0之间，如果混有蛋白质，多肽，酚之类的杂质，那280时的吸收峰就变高了，曲线随之发生变形，而260时的吸收峰不变。就如你所说的“原因在 于蛋白质在260nm的消光系数比核酸小很多”，因此260的吸收峰几乎不变。但280时却不一样。这时相反，核酸的消化系数比蛋白质小的多，因此，一旦有污染，280上升很快。因此260/280在有污染的情况下就会变小。所以，用260/280的方法，还是比较可靠的。当然更可靠的，就是用200-750的波长，连续扫描。直接观察核酸的整条曲线，那比光靠260,280两个吸收值，肯定要准确很多。其实平时在我们检测时，我们也会检测230,320,两个值。至于这两值的作用，我稍后再说。其实有230,260,280,320,这四个点。基本上也能确定下这条曲线的该一段的形状了。
A 260 / A 280 的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样品，比值大于 1.8（DNA）或者 2.0（RNA）。如果比值低于 1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A 230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0。A 320 检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A 320 一般是 0。（320差不多也就是那条曲线刚下降到0的时候）。所以，当我们检测260/280后，如果比值在1.8-2.0之间时，我们可以说其纯度可以，那OD260的值就有效。否则，OD260的值判为无效。你说的嘌噙与嘧啶的吸光值，确实没错。但一般情况下，我们测的都是基因组、tRNA，mRNA、cDNA，所以其CG含量都比较均匀。都适用于这种方法。然而，在测某些CG含量明显不均匀的情况下，比如人工合成的寡核苷酸、引物，在CG含量过大或者过小的情况下，我们就不能用260/280的方法了。不过一般自已合成的引物，都能保证纯度的，买来的引物，或者托公司合成的寡核苷酸，也不需要我们用OD值方法重新测一下。因为产品包装上写着多少个OD，序列长度，都非常详细，纯度也是有保证的。
当OD 260/ OD280值=1.8说明所提的DNA质粒的纯度比较高，所含的RNA或蛋白质污染很少，当 OD 260/ OD280值>1.8，说明有RNA污染，当OD 260/ OD280值<1.8时,说明所提的DNA中有蛋白质或者是抽提时用的苯酚未除净，楼主所体的质粒DNA的260/280在2.0左右，说明有一定的RNA污染，在提质粒DNA中，一般是在提完质粒后，加入TE溶液时加入一定量的RNA酶。抽提1.5ml大肠杆菌过夜菌液时，最后加入20ul的TE溶液时加入1.5ul浓度为10mg/ml的RNA酶，一般就可以完全去除质粒中所含的RNA污染
有关RNA的吸光度说明如下：260nm、320nm、230nm、280nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白质等有机物的吸光度值。OD260/OD280（R）体现了RNA中的蛋白质等有机物的污染程度，质量较好的RNA的R值应在1.8～2.0之间，当R<1.8时，溶液中的蛋白质等有机物的污染比较明显；当R>2.2时，说明RNA已经被水解成了单核苷酸。在对核酸进行吸光度检测时，需要注意稀释液应使用TEBuffer。

八字到底准不准确可信度有多高

遇见有点能力的准确度可以达到60%-80%，如果没有能力就不好说了