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银染是检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质，是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上显色的原理。银染的方法种类很多，目前有文献报导的就有100多种。但是其准确的染色机制还不是特别地清楚。大致的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。由于银染的灵敏度很高，可染出胶上低于1 ng/蛋白质点，故广泛的用在2D 凝胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。

基本介绍

中文名：银染外文名：silver staining实验目的：检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质试剂：乙醇、冰醋酸（纯乙酸）程式：25ml冰醋酸 10% 冰醋酸 套用,实验操作流程,注意事项,

套用

这里介绍的是我们实验室成功运用的银染方法，对关键操作及要求做了补充！主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测！如内源性GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究 。

实验操作流程

实验目的：检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。 实验原理：在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。 试剂：乙醇、冰醋酸（纯乙酸）、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA. Na2.2H2O、甲醛 实验操作程式： 固定：30min或者更长时间 100ml 乙醇 40% 乙醇 25ml冰醋酸 10% 冰醋酸 加水到250ml 致敏：30min 75ml乙醇 30%乙醇 17g乙酸钠 28.2g三水乙酸钠 0.5g硫代硫酸钠（大苏打） 加水到终体积250ml 水洗：3 x 10min 银染：20min 0.625g AgNO3 100ul 37%甲醛（在使用前加入） 加水到终体积250ml 水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色) 显色：视情况而定 6.25 g Na2CO3 50ul 37%甲醛（在使用前加入） 加水到终体积250ml 终止：10min 3.65g EDTA. Na2.2H2O或者1g甘氨酸 加水到终体积250ml 保存：1%冰醋酸，4 ℃

注意事项

1．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。 2．甲醛在使用前加入。 3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。 4．显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。 5．银染液和显色液需要预冷。 6．所用器皿要很洁净，不用手直接接触，以免杂蛋白污染！ 7．清洗用水尽量用高纯度去离子水，蒸馏水更佳，可以减少背景着色。