慢病毒感染T细胞需要多少的MOI 慢病毒感染Jurkat细胞后问什么会有部分细胞死亡

慢病毒感染Jurkat细胞后问什么会有部分细胞死亡  

慢病毒感染Jurkat细胞后问什么会有部分细胞死亡

知不知道细胞很小的，你细胞衰老后会被水解掉留下部分营养物质于细胞外液中供新分化的利用，位置恰不恰当当然恰当，这是基因决定的，再说了细胞可在特定范围内流动，新细胞在此范围里就可以了.。总之，就是基因的作用，让你细胞该在哪就在哪
可能有多种原因： 目标蛋白对细胞有毒性，导致细胞死亡； 转染试剂以及DNA用量资讯需要优化，否则对细胞具有伤害； 细胞贴壁转染之后没有正常换液。 建议： 考虑对目标蛋白进行截短构建、尝试其他细胞系统； 摸索转染试剂以及DNA用量资讯，如果转染试剂毒性太大，可以考虑尝试义翘转染试剂sinofection； 对转染后的细胞进行换液处理，如果细胞状态感觉不够理想，可以考虑新增一些血清来帮助细胞恢复健康。 以上所有分析、建议的前提是，细胞培养、无菌操作等等都没有问题。祝顺利，加油~

慢病毒感染细胞后目的基因的表达是未感染细胞的多少倍

这个没办法回答具体数字。如果慢病毒带入的是原来一点都没有表达的基因，那么倍数就是无限的，如果原来细胞表达的本地就很高很高了，增加个一两倍就不错了。一般情况下表达本地很低的能到几百上千倍。

raw264.7细胞用慢病毒转染入smad1 shRNA后因为汇入的rna导致细胞死亡吗？

这个要看实验结果。
shRNA是不会完全使得smad1消失的，转入rna是什么意思？拯救吗？如果是拯救那么细胞死掉理论上是不太会出现的，真的出现就真的有点意思了。更多的还是考虑转染过程导致死亡的可能吧

包装好的慢病毒感染细胞后，在细胞中通过什么启动子来表达基因

慢病毒生产及使用操作手册
一、实验流程
制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。
二、实验材料
（一）慢病毒载体、包装细胞和菌株
该病毒包装系统为三质粒系统，组成为pspax2, pMD2G, pHBLVTM系列质粒。
1、载体资讯（见附录）
2、细胞株 293T，慢病毒的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为DMEM(含10% FBS)。贴壁细胞经培养生长增殖形成单层细胞。
3、菌株 大肠杆菌菌株DH5α。用于扩增慢病毒载体和辅助包装载体质粒。
三、包装细胞293T细胞的培养
（一） 293T细胞的冻存
随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降、突变等。为了防止此类现象的出现，我们需要在开始就对细胞进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。
1、去掉上清液，加入PBS洗去残留的培养基；
2、加入0.25%的胰酶，消化1～2min后，镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，去除胰酶，加入新鲜培养基吹打混匀，移入离心管中。
3、细胞计数，将细胞全部晃下，加入 3mL 37 ℃ 预热的 10％ DMEM，用 10mL 移液管进行吹打，较大力吹打 6～8 次即可，不留死角，之后，将所有细胞吸出，置于15mL 离心管中，取 50ul 混匀后的细胞于 1.5mL eppendorf 管中，加 入 450ul 10％ DMEM，即为 10 倍稀释，混匀，取 10ul 细胞于计数板 中计数。计数板上共 4 大格，每大格 16 小格。计数时，4 大格均计 数，总数除以 4（得每大格细胞数），再乘以 10（10 倍稀释），即 为实际 n万/mL 细胞浓度。
4、细胞离心，1000rpm，5min。去掉上清。
5、根据细胞计数结果加入细胞冻存液（70%完全培养基+20%FBS+10%DMSO）,重悬细胞，密度为3 x 106个/ml。
6、分装进细胞冻存管，放入冻存盒中，放入-80℃超低温冰箱。
7、第二天将细胞放于液氮罐中长久储存，并作记录。储存过程中，要不时复苏细胞检测细胞存活率，观察细胞状态等。
（二）293T细胞的传代
当细胞生长到汇合率达到80%～90%时需要对细胞进行传代操作，以扩大细胞数量，维持细胞良好的生长状态。
1、消化细胞，方法同细胞冻存。
2、细胞离心结束后，加入完全培养基重悬。
3、根据具体情况，将细胞分到10cm培养皿中，每个培养皿补足到10ml培养基。
4、将培养皿平稳放回37℃、5%CO2和95%相对溼度的培养箱中培养。
（三）293T细胞的复苏
当细胞传代次数过多，细胞状态变差时，或者细胞出现污染事故时，需要丢弃并对最初冻存的细胞进行复苏。
1、设定温度为37～42℃的水浴。
2、检视细胞库记录，根据记录从液氮罐中取出冻存的细胞（需戴上棉手套，防止被冻伤），迅速丢入水浴锅中并快速晃动，尽量在1～2min内使细胞溶液完全溶解。
3、将细胞溶液转移到15ml离心管中，并在其中加上1ml新鲜的完全培养基，混匀后离心，1000rpm，5min。
4、去掉上清，加入5ml新鲜的完全培养基，混匀沉淀后，转入6cm培养皿。
5、将培养皿平稳放入37℃、5%CO2和95%相对溼度的培养箱中培养。
6、第二天观察细胞存活率。给细胞换一下培养基。以后每天观察细胞生长情况。
四、慢病毒包装和浓缩
（一）质粒扩增
构建好的慢病毒载体和辅助质粒需经过大量抽提，浓度大于1ug/ul,A260/280在1.7-1.8间方可用以包毒。推荐使用Qiagen大抽试剂盒进行质粒的大量去内毒素抽提。
（二）传293T细胞
将培养293T细胞T75瓶中的培养基吸净，加入2mL 4度冰箱取出的0.25%胰酶，使其均匀覆蓋瓶底，置于37度培养箱中3-5min，取出，摇晃可发现细胞于底部脱离，将其全部晃下，加入3mL 37度水浴中预热的10％ DMEM，移液枪用10mL移液管进行吹打，较大力吹打6-8次即可，不留死角，瓶口处较难吹打可将移液管对准培口，小力将培养基打出即可覆蓋到接近瓶口的细胞。之后，将所有细胞吸出，置于15mL离心管中，取50ul混匀后的细胞于1.5mL eppendorf管中，加入450ul 10％ DMEM，即为10倍稀释，混匀，取10ul细胞于计数板中计数。计数板上共4大格，每大格16小格。计数时，4大格均计数，总数除以4（得每大格细胞数），再乘以10（10倍稀释），即为实际n万/mL细胞浓度。传代当天记为第一天，若第二天进

慢病毒感染细胞的时候是要换成无血清培养基吗

慢病毒感染细胞的时候是要换成无血清培养基
常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。

爱滋病毒使T细胞死亡,是细胞凋亡还是细胞坏死

科学的问题当然应该科学地求证，难以理解楼上的怎能未经查证信口开河。
HIV诱导的细胞死亡主要通过以下三种方式：（1）感染所导致的直接细胞毒性，（2）被直接感染的细胞所发生的细胞程式性死亡（包括凋亡和非凋亡方式），（3）未被直接感染的细胞（既所谓的旁观者细胞）所发生的细胞程式性死亡 （Cummins et al., Cell Death and Disease, 2010）。有文献报道说坏死（ necrosis）和凋亡(apoptosis)共同参与HIV诱导的CD4淋巴细胞的死亡（Plymale et al., AIDS, 1999）。如果确实HIV会导致被感染细胞的坏死，那可能是通过上述的第一个途径。然而，更多的研究发现，HIV主要是通过凋亡途径诱导淋巴细胞的死亡（Cummins et al., Cell Death and Disease, 2010）。这些途径可以分为两类：一类是利用宿主的凋亡诱发分子，如Fas ligand, tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) 和TRAIL；另一类则是HIV自身编码的具有促凋亡活性的蛋白，例如Gp120, Tat, Vpu, Nef, Vpr等（这些蛋白中一部分同时还具有抗凋亡的双重活性）。
另外，一篇两年前发表在生物学顶极杂志《Cell》上的一篇文章表明，只有不到5%的CD4 T淋巴细胞被有效感染（productively infected， 即可以从被感染细胞中生产出新的病毒颗粒），而95%的以前被认为未被直接感染的旁观者细胞（bystander），则被发现同样也被病毒侵入，只是病毒的基因组在复制的过程中被打断，而这种“流产（abortive）”的中间物能被宿主细胞以某种尚未得知的方式感应到，从而启动牺牲自我的保护式自杀——细胞凋亡(apoptosis) （Doitsh et al., Cell, 2010）。该文章提出，这种流产式的HIV感染能启用caspase-3，从而诱发凋亡，并且可以启用caspase-1，从而促进促炎症因子(proinflammatory cytokines)的加工和释放。而这些促炎症因子则可能会吸引更多的未被感染的淋巴细胞，从而进一步加剧病毒的扩散。因此，这种原本是宿主的自我保护的先天免疫机制，恰恰被HIV用来导致宿主的免疫疾病。
综上所述，虽然坏死可能也参与HIV导致的淋巴细胞的死亡，但主要机制（超过95%）还是通过细胞凋亡。
参考文献
Cummins NW, Badley AD. Mechanisms of HIV-associated lymphocyte apoptosis: 2010. Cell Death Dis. 2010 Nov 11;1:e99.
Doitsh G, Cavrois M, Lassen KG, Zepeda O, Yang Z, Santiago ML, Hebbeler AM, Greene WC. Abortive HIV infection mediates CD4 T cell depletion and inflammation in human lymphoid tissue. Cell. 2010 Nov 24;143(5):789-801.
Plymale DR, Tang DS, Comardelle AM, Fermin CD, Lewis DE, Garry RF. Both necrosis and apoptosis contribute to HIV-1-induced killing of CD4 cells. AIDS. 1999 Oct 1;13(14):1827-39.

爱滋病毒使T细胞死亡，是细胞凋亡还是细

不属于
细胞凋亡（apoptosis）指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的启用、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。
细胞凋亡的一个特点就是在病理或生理条件下的一个主动过程，但是艾滋病毒攻击效应t细胞不是这个范畴，攻击后只是导致了细胞变性和坏死，因此不是凋亡。希望对你有帮助，望采纳。

慢病毒转染进细胞后细胞会漂浮起来吗

不会的。要是你转染的病毒的moi太高，细胞状态会不好，会漂浮起来，死掉。。。

细胞死亡多久里面病毒才会死亡

病毒不会因为细胞死亡就会死亡。活体内部细胞死亡病毒会继续感染新的寄主。如果说面板表面哪种型别的细胞，死后病毒接触空气，会因为外界条件不同，存活时间也会不同，几秒-15天不等

细胞死亡是细胞癌变的结果吗为什么细胞死亡不是细胞

细胞死亡是代谢停止、结构破坏和功能丧失等不可逆性变化.而癌变的细胞可以无限繁殖,没有接触抑制,不断增长的.